سیل ثقافتوں کے کریوپریژرویشن کے لئے بنیادی نکات

سیل ثقافتوں کے کریوپریژرویشن کے لئے بنیادی نکات

عام نمو کی سرگرمیوں کے دوران خلیات اپنا میٹابولزم جاری رکھتے ہیں ، جس کے لئے مختلف پروٹیز کی شرکت کی ضرورت ہوتی ہے۔ جب درجہ حرارت -70 ° C سے نیچے آجاتا ہے تو ، پروٹیز کام کرنا چھوڑ دیتے ہیں۔ لہذا ، انتہائی کم درجہ حرارت والے ماحول میں ، خلیات اپنی میٹابولک سرگرمیوں کو روک سکتے ہیں اور ایک غیر فعال حالت میں داخل ہوسکتے ہیں جو طویل مدتی اسٹوریج کی اجازت دیتا ہے۔

1. تجرباتی مواد

بیس مواد:

بنیادی ثقافت کا میڈیم

سیرم (روایتی ایف بی ایس/این بی ایس)

الٹرا پور ورک بینچ

جراثیم سے پاک ڈیمیتھل سلفوکسائڈ (DMSO)

جراثیم سے پاک پی بی ایس فاسفیٹ بفر نمک حل

پائپٹنگ بندوق

الیکٹرک پائپٹنگ بندوق

تجربات کی تیاری

a) منجمد حل کی تیاری:

عام خلیات: 55 ٪ بیسل میڈیم + 40 ٪ بوائین سیرم (FBS/NBS) + 5 ٪ DMSO

اہم خلیات: 90 ٪ بوائین سیرم (FBS/NBS) + 10 ٪ DMSO

ایلیکوٹ تیار شدہ کریوپریجریشن حل کو 15 ملی لیٹر سینٹرفیوج ٹیوب [گھوںسلا] میں اور بعد کے استعمال کے لئے 4 ° C پر اسٹور کریں۔

(b) خلیوں کی تیاری منجمد ہونے کے لئے:

خلیوں کو منجمد کرنے سے پہلے ، اچھی نمو کی حیثیت والے خلیوں کو منتخب کریں اور لوگرتھمک نمو کے مرحلے میں اور سیل کی حالت کو برقرار رکھنے کے لئے منجمد ہونے سے پہلے ان کو تازہ میڈیم 12-24 گھنٹے پہلے تبدیل کریں۔

2. تجرباتی طریقہ کار

1. خلیوں کی کثافت کو منجمد کرنے کا مشاہدہ کریں ، جو تقریبا 80 80 ٪ ~ 90 ٪ ہے۔ پرانے میڈیم کی خواہش کے ل a پائپٹ گن کا استعمال کریں ، خلیوں کو 1-2 بار دھونے کے لئے جراثیم سے پاک پی بی ایس ڈالیں ، اور ثقافت کے ماحول میں باقی میڈیم کو دور کریں۔

2. ٹرپسن کو ٹرپسن یا ہاضمہ کا جوس کی مناسب مقدار میں شامل کریں تاکہ ٹرپسن کو خلیوں میں داخل ہوسکے ، اور ہاضمہ کے ل the انکیوبیٹر میں رکھیں۔ مائکروسکوپ کے تحت خلیوں کی حالت کا مشاہدہ کریں: سائٹوپلازم پیچھے ہٹ رہا ہے اور خلیوں کو اب شیٹوں میں جڑا نہیں جاتا ہے۔ اس مقام پر ، عمل انہضام کے عمل کو روکنے کے لئے اسٹاپ حل شامل کریں۔

3. سیل معطلی کی تشکیل کے ل a ایک نوک کے ساتھ خلیوں کو آہستہ سے بلبلا کریں اور 3-5 منٹ کے لئے 1000 آر پی ایم پر سیل معطلی کو سینٹرفیوج کریں۔

سپرنٹنٹنٹ کو ضائع کریں ، منجمد حل کی ایک مناسب مقدار شامل کریں ، اور خلیوں کو یکساں طور پر گننے کے لئے آہستہ سے پپیٹ شامل کریں۔ حتمی کثافت 5 × 106/ml ~ 1 × 107/ml بنانے کے لئے Cryopresived میڈیم کے ساتھ سیل کثافت کو ایڈجسٹ کریں۔

4. متوقع صلاحیت کے مطابق کریوجینک ٹیوبوں کو الگ کرنے کے لئے ایک پائپٹ گن کا استعمال کریں ، اور ٹوپی اور مہر لگانے کے لئے خودکار کیپنگ مشین کا استعمال کریں۔

5. معیاری کریوپریژرویشن پروگرام -1 ° C سے -2 ° C/منٹ کی ٹھنڈک کی شرح ہے ، اور خلیوں کو منجمد ہونے والے خلیوں کو آہستہ آہستہ مندرجہ ذیل مراحل کے مطابق منجمد کیا جاسکتا ہے: کمرے کا درجہ حرارت → 4 ° C (20 منٹ) → - - - 20 ° C (30min) → -80 ° C ° C (راتوں رات) → مائع نائٹروجن میں طویل مدتی اسٹوریج۔

یہ راتوں رات -80 ° C پر براہ راست ایک فریزر میں بھی محفوظ کیا جاسکتا ہے اور پھر اسٹوریج کے لئے مائع نائٹروجن میں منتقل کیا جاسکتا ہے۔

یونگیو میڈیکل ایک ہائی ٹیک انٹرپرائز ہے جو آر اینڈ ڈی ، بائیو میڈیکل استعمال کی اشیاء کی پیداوار اور فروخت میں مہارت رکھتا ہے۔ پائپٹ ٹپس ، پپیٹ ، پی سی آر پلیٹ ، سیل کلچر کی مصنوعات اور دیگر حیاتیاتی لیبارٹری استعمال کی اشیاء۔ یونگیو میڈیکل آپ کے اعتماد اور انتخاب کے لائق ہے! مشورہ کرنے میں خوش آمدید!